微囊藻毒素，MC，Empore，47mm固相萃取膜

前言：

微囊藻毒素（Microcystin，MC）是一类具有生物活性的，自然环境中广泛分布的肝毒素。它对人体蛋白磷酸酶1 和蛋白磷酸酶2A 具有抑制作用，与肿瘤促进作用有直接关系。中国生活饮用水卫生标准（GB/T 5749-2006），将饮用水中微囊藻毒素含量限制为1.0μg/L，该标准的实施对水源水的质量提出了更高的要求[1]。

实验中，采用1升水样通过47mm的Empore™ C18固相萃取膜片（货号：98-0604-0217-3）处理，并用含0.1%三氟乙酸的甲醇溶液洗脱。然后通过HPLC对提取物进行定量[2]。

1， 实验过程

1.1 仪器与试剂 

所有试剂均为分析纯或更高。

微囊藻毒素-LR标准物质（农业部环境保护科研监测所，20μg/mL，溶剂：甲醇）；

Empore^TM 固相萃取膜：C18，47mm，购自美国CDS公司（货号：98-0604-0217-3）；

甲醇（色谱纯， Fisher Chemical）

三氟乙酸（分析纯，天津市福晨化学试剂厂）

磷酸二氢钾（分析纯，北京化学试剂公司）

磷酸（分析纯，国药集团化学试剂公司）

纯净水，产自Milli-Q® EQ 7000系统，美国密理博Millipore公司

磷酸二氢钾溶液（0.05mol/L）：称取6.8g磷酸二氢钾，用水溶解，定容至1000.0mL

磷酸盐缓冲液：用20%（体积分数）磷酸溶液将磷酸二氢钾溶液调至pH到3

0.1%三氟乙酸-甲醇溶液：用甲醇将0.1mL三氟乙酸定容至100.0mL

Sepaths UP 柱膜通用全自动固相萃取系统，北京玉米视频在线观看仪器股份有限公司；

高效液相色谱仪：LC600 二元高压梯度高效液相色谱，北京玉米视频在线观看仪器股份有限公司。

1.2 工作液配制 

微囊藻毒素-LR工作液：将20μg/mL微囊藻毒素-LR标准物质用甲醇稀释至浓度为2μg/mL；

1.3 实验

1.3.1 样品制备

1L 自来水中加入100mg硫代硫酸钠，再加入200μL的 2μg/mL 微囊藻毒素-LR标准工作液，样品的加标浓度为400ng/L。超声30min，待萃取。使用同一批Empore^TM 固相萃取膜(C18，47mm)对每个样品进行四次重复制备。

1.3.2 净化与浓缩

将样品及Empore^TM 固相萃取膜（C18，47mm）加入Sepaths UP 柱膜通用全自动固相萃取系统，并按照图1所示的方法进行Sepaths UP方法编辑并进行固相萃取富集，收集洗脱液。

对洗脱液进行氮吹浓缩，当收集液浓缩到近干时，加入流动相定容到1.0mL，待HPLC检测。

图1 微囊藻毒素-LR SPE富集方法

1.3.3 HPLC分析

色谱柱：LabParts C18反相柱，5μm，4.6×250mm；

波长：238nm；

流速：1mL/min；

柱温：35℃；

进样量：20μL；

流动相：甲醇：磷酸盐缓冲溶液= 65：35

2, 实验结果 

图2，微囊藻毒素-LR标准工作液色谱图（0.4ppm）

3，结果与讨论 

本次实验展示使用Empore^TM 固相萃取膜(C18，47mm，固相萃取柱，货号：98-0604-0217-3)对自来水中微囊藻毒素-LR进行富集提取的方法。实验中，样品经固相萃取净化、浓缩等前处理步骤后，经HPLC分析得到微囊藻毒素-LR的加标回收率达80.1%~86.4%，结果较好。四次重复实验RSD=3.1%，通道间的平行性良好。实验表明，Empore^TM 固相萃取膜(C18，47mm，固相萃取柱，货号：98-0604-0217-3)适用于消微囊藻毒素-LR的萃取净化。

4，参考文献

[1] GB/T 5749-2006 生活饮用水卫生标准

[2]GB/T 20466-2006 水中微囊藻毒素的测定

图 3 加标样品色谱图

表1 加标回收率结果